SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了,刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方,这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。
1. 分离胶(12%)

配制

所需试剂

所需体积

分离胶(12%)

30%丙烯酰胺

6.0 ml

1.5 mol/l Tris-HCl

3.8 ml

10%SDS

150 μl

10%过硫酸铵

150 μl

TEMED

6 μl

蒸馏水

4.9 ml

2. 浓缩胶(5%)

配制

所需试剂

所需体积

浓缩胶(5%)

30%丙烯酰胺

1.3 ml

1.5 mol/l Tris-HCl

1.0 ml

10%SDS

80 μl

10%过硫酸铵

80 μl

TEMED

8 μl

蒸馏水

5.5 ml

3. 分离胶缓冲液(pH8.9)

配制

所需试剂

所需体积

分离胶缓冲液

Tris

36.6 g

1 mol/l HCl

48 ml

蒸馏水

补足至100 ml



4. 浓缩胶缓冲液(pH6.7)

配制

所需试剂

所需体积

浓缩胶缓冲液(pH6.7)

Tris

5.98 g

1 mol/l HCl

48 ml

蒸馏水

补足至100 ml



5. 30%丙烯酰胺(pH≤7.0)

配制

所需试剂

所需体积

30%丙烯酰胺(pH≤7.0)

丙烯酰胺

29 g

甲叉-双丙烯酰胺

1 g

蒸馏水

补足至100 ml



6. 10%过硫酸铵(W/V):1g过硫酸铵溶于10ml水中,4℃保存数周,尽量现用现配。
7. 10%SDS:将10 g SDS溶于80ml重蒸水中并轻缓搅拌(室温低时需水浴加热溶解),再定容至100ml,室温存放。
8. 样品缓冲液

配制

所需试剂

所需体积

样品缓冲液

1 M Tris-HCl(pH6.7)

5 ml

SDS

2.5 g

巯基乙醇

1 ml

溴酚兰

0.05 g

蔗糖

10 g

蒸馏水

补足至100ml

9. 考马斯亮蓝染色液:0.25g考马斯亮蓝R-250用少量甲醇溶解后,用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀释至100ml。
10. Tris-甘氨酸电泳缓冲液(pH8.3)

配制

所需试剂

所需体积

Tris-甘氨酸 电泳缓冲液(pH8.3)

Tris碱

15.1 g

甘氨酸

94 g

10%(W/V)SDS

50 ml

去离子水

补足至100 ml

凝胶配制所需试剂的母液不能放置太久,有条件的实验室可将母液保存在4度冰箱中,放置母液被微生物污染或者出现沉淀。